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如何辨别倒置生物显微镜下的坏死细胞

发布时间:2020/3/11 点击量:646

如何辨别倒置生物显微镜下的坏死细胞

    倒置生物显微镜多用来观察和研究生物切片、细胞细菌以及活细胞组织培养、流质沉淀等,同时也可以用来观察其他透明或半透明物体以及粉末、细小颗粒等。在观察细胞时,有些实验要求用药物来处理细胞,在不同药物浓度下细胞可能坏死,也可能调亡。先介绍两个概念:
    1)凋亡:凋亡是指细胞在一定生理和病理条件下,遵循自身程序,由基因调控的主动性死亡过程。因此,从活细胞凋亡到死亡有一定过程和有一定时间跨度的,根据凋亡的诱因不同,时间跨度从几小时到几天不等。凋亡过程中首先出现的是细胞膜的不对称改变即PS的外翻和线粒体的膜电位的改变;随后出现染色质浓缩、边缘化,细胞体积变小,变形,细胞膜的通透性改变和DNA的片段化;凋亡晚期细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体,贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落;zui后随溶酶体裂解、蛋白酶的释放激活,细胞崩解。因此,凋亡的一个动态的过程,随时间的推移、诱导凋亡原因和检测方法的不同,检测和观察结果也大不相同。
    2)坏死:活细胞在某些因素的作用下直接进入死亡阶段,从而很难和晚期凋亡相区别。
    那么在倒置荧光显微镜下如何辨别已经坏死的细胞呢?
香港摇钱树摇钱网站-687788com摇钱树-54924摇钱树-784123摇钱树-摇钱树网站30码中特     我们采用Hoechst33342和碘化丙啶(PI)双染的方法。细胞发生凋亡时,染色质会固缩。Hoechst 33342可以穿透细胞膜,染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。上述两种染料双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时,正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光,凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光,坏死细胞为强红色荧光+强红色荧光+强蓝色荧光。这种凋亡和坏死鉴定的试剂盒在市场上也很常见。

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